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说说BK-FL正置荧光显微镜标本制作特点和观察要求

发布时间:2021-04-16   点击次数:401次
  BK-FL正置荧光显微镜是利用特定波长的光照射被检物体产生荧光进行镜检的显微光学观测技术。近年来,由于免疫荧光在医学研究、诊断领域里的广泛应用,FISH、绿色荧光蛋白(GFP)技术分别在基因组学、蛋白质组学研究方面的推广,显微照相、数字CCD成像技术的辅助驱动,赋予这一传统技术更新的应用价值和生命力。
 
  荧光现象有两种:一次荧光现象,又称“固有荧光”或“自发荧光”,是指经照射后,就能发出荧光的物质,此类物质的化学特征是发光分子具有共轭双键,π电子活动性大。二次荧光现象,又称“继发荧光”,物质经照射后不能或只能部分发生微弱的荧光,这样就需先用荧光色素标记处理,将荧光色素标记结合插入到不发光的活性分子中去,再经照射才能发生荧光。荧光色素应具备的基本条件是能与不发光分子的某个区域有特异性的牢固结合,同时不会影响被结合分子的结构和特性,光量子效率应≥013。
 
  BK-FL正置荧光显微镜标本制作特点和观察要求
 
  (1)载玻片:载玻片厚度应在0.8―1.2mm之间,玻片太厚吸收光多,激发光难以在标本上聚集。载玻片必须光洁,厚度均匀,无明显自发荧光。有时需用石英玻璃载玻片。
 
  (2)盖玻片:盖玻片厚度应约0.17mm,光洁。为加强激发光,也可用干涉盖玻片,这种特制盖玻片的表面镀有若干层对不同波长的光起不同干涉作用的物质(如氟化镁),它可以使荧光顺利通过而反射激发光,这种反射的激发光可激发标本中的荧光。
 
  (3)标本:组织切片或其他标本不能太厚,一般以5~20pm为宜,切片太厚可使激发光大部分消耗在标本下部,而物镜直接观察的标本上部不能被激发。切片折叠或杂质过多均可影响荧光的观察。
 
  (4)封片剂:封片剂必须无自发荧光、五色透明。加上抗淬灭剂后再用指甲油将盖玻片四周封固,既保持盖玻片不滑动,又能防止抗淬灭剂蒸发。在没有抗淬灭剂的情况下,也可使用含30%甘油的PBS,还可用甘油与0.5mol/L碳酸盐缓冲液(pH 9.0~9.5)等量混合液作封片剂。
 
  (5)镜头的清洁:在油镜使用完毕后,需用擦镜纸沾上无水乙醇或3:7的醇醚混合液轻轻擦拭。
 
  (6)及时观察:标本染色后应及时观察,因时间过长荧光会逐渐减弱。若标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存,可延缓荧光减弱时间。
 

BK-FL正置荧光显微镜

 

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